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EdU細胞增殖成像分析試劑盒

簡要描述:EdU細胞增殖成像分析試劑盒可以進行高效快速的檢測出DNA復制活性,此技術廣泛應用于細胞增殖、細胞分化、生長與發育、DNA損傷修復等方面的研究。

  • 產品型號:AC11L251
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2024-08-07
  • 訪  問  量:1392

詳細介紹

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應用領域化工,生物產業,綜合


EdU細胞增殖成像分析試劑盒

產品描述
細胞增殖是評價細胞活性、代謝、生理和病理狀況的重要指標。EdU (5-Ethynyl-2`- deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,其連有的炔烴基團在天然化合物中很少見,能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)摻入正在復制的DNA分子中,通過基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應,把熒光基團標記到新合成的含有EdU的DNA上面,這樣可以進行高效快速的檢測出DNA復制活性,此技術廣泛應用于細胞增殖、細胞分化、生長與發育、DNA損傷修復等方面的研究。
傳統的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法需要DNA變性、抗原修復、抗原抗體過夜孵育等復雜繁瑣的操作步驟。而EdU檢測方法不需要劇烈的DNA變性,只需溫和的細胞固定化和透化處理,能夠較好地保護細胞形態、DNA整體結構及細胞內抗原識別位點,操作步驟更加快速、靈敏和準確。EdU與胸腺嘧啶(T)結構非常相似,大小卻只有BrdU抗體的1/500,很容易在細胞內擴散;無需抗原抗體反應,能在細胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復制活性。
訂購信息

產品名稱貨號規格價格
EdU細胞增殖成像分析試劑盒AC11L251
100 T880

產品組分

產品組分規格
EdU溶液40 μL
反應緩沖液1 mL
催化劑溶液400 μL
TAMRA 紅色熒光溶液25 μL
緩沖添加劑200 mg
Hoechst 3334220 μL


運輸與保存
藍冰運輸。-20℃保存,有效期12個月。
使用方法(以24孔板,HK2貼壁細胞為例)
本試劑盒是采用成像檢測方法進行檢測,適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。以下方式適用于貼壁細胞;非貼壁細胞可在孵育EdU后進行細胞涂片處理,固定后再采用貼壁細胞的染色流程進行檢測。
EdU標記
1.將細胞培養基與EdU溶液按照500:1的比例混合,制成2×EdU標記培養基。
2.提前將2×EdU標記培養基預熱,然后將150微升2×EdU標記培養基與等體積細胞培養基混合,獲得1×EdU溶液。
【注】:①不建議替換全部培養基,這樣可能會影響細胞增殖的速度。②配置好的培養基建議現用現配,用量以沒過細胞為宜。
3.孵育細胞2 h,棄培養基。
【注】:①培養時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態。②大多數腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2 h的孵育時間。
4.以1xPBS清洗細胞兩次,每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。
【注】:對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。
細胞的固定和通透
1.每孔加入150μL 4%多聚甲醛細胞固定液,室溫培養30 min,棄固定液。
2.每孔加入150μL 2mg/ml甘.an.suan,搖床孵育5 min,以中和過量的多聚甲醛。
3.棄甘.an.suan.溶液,每孔加入300μL PBS 洗液,室溫清洗5 min。
4.每孔加入 300μL 0.5% Triton X-100 細胞通透液,室溫通透10 min,棄細胞通透溶液。
5.每孔加入300μL PBS洗液,室溫清洗 5 min。
EdU染色
1.通過用10:1去離子水稀釋反應緩沖液,進行配制1×反應緩沖液。
2.按照溶解200 mg緩沖添加劑溶于1 mL 去離子水的比例稱取適量的粉末進行溶解,即為可用的緩沖添加劑的濃度,建議現用現配。
【注】:緩沖添加劑為白色粉末,較難準確稱量,稱量范圍可稍微放寬,但是不應超過±20%,且該粉末較易氧化,使用后請旋緊管蓋,如試劑出現棕黃色,則需報廢或更換。
3.按照以下的表格進行染色反應液的配制:

染色反應液組分500 μL1 mL2 mL5 mL
1X反應緩沖液430 μL860 μL1.8 mL4.3 mL
催化劑溶液20 μL40μL80 μL200 μL
TAMRA紅色熒光溶液1.2 μL2.5 μL5 μL12.5 μL
緩沖添加劑50 μL100 μL200 μL500 μL

4.每孔加入100 μL配置好的檢測混合液,以覆蓋細胞為宜,避光、室溫孵育30 min。
5.棄染色反應液,加入300 μL 0.5% Triton X-100細胞滲透液清洗2-3次,每次10 min。
6.棄細胞滲透液,用PBS洗兩次,每次 5 min。
DNA染色
1.將Hoechst 33342 *超級純*(李記貨號:AC12L021)PBS溶液1:1000進行稀釋得到1×Hoechst染色液。
2.每孔加入150 μL 1×Hoechst染色液,室溫避光孵育20-30 min后,棄染色液。
3.每孔加入300 μL PBS洗細胞兩次,去掉洗液。
圖像獲取及分析
  建議染色完成后立即進行熒光顯微鏡拍照觀察;如果條件限制,請于4℃條件下避光濕潤保存3 d之內完成拍照。若為細胞爬片或涂片,可使用抗熒光淬滅封片劑進行封片后于4℃條件下保存及拍照檢測。

熒光染料最大激發波長最大發射波長熒光顏色
TAMRA541 nm567 nm橘紅色熒光
Hoechst 33342350 nm461 nm藍色熒光

注意事項

  1. 本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。

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