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品牌 | 其他品牌 | CAS | / |
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分子式 | / | 純度 | / |
分子量 | / | 貨號 | AC11L054 |
規格 | 20*500T | 供貨周期 | 現貨 |
主要用途 | 用于細胞增殖測定,細胞毒性的檢測,藥物篩選,以及細胞生長抑制檢測等。 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
Cell Counting Kit-8 (CCK-8試劑盒),是一種基于WST-8(化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)而廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度的比色檢測試劑盒。檢測原理為:WST-8在電子耦合劑1-Methoxy PMS存在的情況下,可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜(formazan,參考圖1),生成的甲臜的顏色深淺與細胞增殖成正比,與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450nm 波長處測定OD 值,間接反映活細胞數量。
本產品可用于細胞增殖測定,細胞毒性的檢測,藥物篩選,以及細胞生長抑制檢測等。
圖1:WST-8分子結構及檢測原理
訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規格 | 價格 |
CCK-8細胞增殖與毒性檢測試劑盒 | AC11L054 | 500T | 140 |
CCK-8細胞增殖與毒性檢測試劑盒 | AC11L054 | 2*500T | 240 |
CCK-8細胞增殖與毒性檢測試劑盒) | AC11L054 | 20*500T | 1500 |
運輸與保存
藍冰運輸。4℃短期保存,有效期3個月;-20℃長期保存,有效期24個月?!咀ⅰ浚悍磸蛢鋈跁斐蓽y定背景OD值升高。
使用方法
以96孔板為例,96孔板中每孔接種100 μL的細胞懸液,在細胞培養箱預培養24 h。
向每孔加入10 μL不同濃度的待測物質。如果僅測定細胞活性,則不需要2~3步驟,直接從第四步操作。
將培養板在培養箱孵育一段適當的時間 (依據待測藥物而定)。
向每孔加入10 μL CCK-8溶液 (注意不要產生氣泡,輕輕混勻)。
將培養板在培養箱內孵育適當時間(一般0.5~2 h)。
酶標儀測定450 nm處的吸光值。
注意事項
本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。
建議調試合適的接種細胞的數量和加入CCK-8溶液后培養的時間。當使用標準96 孔板時,貼壁細胞至少1000 個/ 孔(100 μL 培養基),白細胞至少2500 個/ 孔(100 μL 培養基)。建議實驗前設定幾個不同細胞數量的梯度孔進行條件測試,細胞培養時間和處理方法根據實驗情況而定,加入CCK-8溶液后(加入體積為每孔細胞培養液體積的10%),在37℃細胞培養箱中孵育,不同時間點后測450 nm處的吸光值(CCK-8敏感性高,一些細胞0.5 h后就可以測定第一次)。
CCK-8試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化反應,如果待檢測體系中有較多還原劑(或抗氧化劑)會造成背景OD值升高,干擾檢測結果。如果實驗中有還原劑,請檢查背景的OD值,設法先去除還原劑干擾。例如,可在加入CCK-8溶液之前更換新鮮的培養基,以去除待測藥物的影響。當待測藥物影響比較小時,可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入待測藥物后的空白吸收即可。
進行藥物抑制實驗時,如果藥物中含有金屬,如Pb2+、Fe2+、Cu2+等金屬會對CCK-8 Solution的顯色反應產生影響,從而導致檢測的靈敏度降低。
如果細胞培養時間較長,培養基顏色發生變化,應洗滌細胞更換培養基后再加CCK-8檢測。細胞培養基酚紅不影響測定結果。
為使CCK-8試劑盒培養基充分混勻,減少CCK-8在移液器上的殘留,建議加樣前用培養基稀釋CCK-8試劑,混勻后加樣。
若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入0.1 M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS 溶液,室溫避光保存,24 h 內檢測,吸光度不會受到影響。(加入1% SDS 溶液的體積與加入CCK-8溶液的體積相同)。
如果吸光值很低,可以適當增加細胞數量或者延長加入CCK-8溶液后孵育的時間。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
CCK-8法的優勢
檢測方法 | MTT法 | XTT法 | WST-1法 | CCK-8法 |
產品性狀 | 粉末 | 2瓶溶液 | 溶液 | 1瓶溶液 |
使用方法 | 配成溶液后使用 | 現配現用 | 即開即用 | 即開即用 |
檢測靈敏度 | 高 | 很高 | 很高 | 高 |
檢測時間 | 較長 | 較短 | 較短 | 最短 |
檢測波長 | 560-600nm | 420-480nm | 420-480nm | 430-490nm |
細胞毒性 | 高,細胞形態*消失 | 很低,細胞形態不變 | 很低,細胞形態不變 | 很低,細胞形態不變 |
試劑穩定性 | 一般 | 較差 | 一般 | 很好 |
批量樣品檢測 | 可以 | 非常適合 | 非常適合 | 非常適合 |
便捷程度 | 一般 | 便捷 | 便捷 | 非常便捷 |
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