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李記生物細胞轉染試劑常見問題(一)

更新時間:2022-11-07      點擊次數:1603

涉及產品

  1. EZ Trans Plus細胞轉染試劑(Ⅱ) 貨號:AC04L011

  2. EZ Trans細胞轉染試劑(高效)  貨號:AC04L091/AC04L092

  3. EZ Trans細胞轉染試劑(低毒)  貨號:AC04L098/AC04L099

其他轉染產品

  1. EZ Trans Pro細胞轉染試劑(GMP) 貨號:AC04L032/AC04L033/AC04L034

  2. EZ Trans RNA轉染試劑       貨號:AC04L051

李記生物細胞轉染試劑常見問題(一)

Q1:李記有3款轉染試劑,這3款有什么區別?和Li**對比效果如何?

A1:我司自行測試與收集客戶反饋數據,得到類似結論:

  效率方面:EZ Trans Plus>Li**2000≈EZ Trans(高效)>Li** 3000>EZ Trans(低毒)

  毒性方面:EZ Trans(低毒)≈Li**3000<EZ Trans Plus<EZ Trans(高效)≈Li**2000

 

 

 

 

 

 


Q2:我們傳的細胞有抗生素,抗生素是絕對會影響轉染效率嗎?

A2:能不加盡量不加,理論上抗生素進不到細胞內,但是在轉染試劑的作用下,細胞的通透性增加,抗生素可能進到細胞內,對實驗結果完成影響。

 

 

 

 

 

 


Q3:protocol提到,要用Opti-MEM稀釋質粒和轉染試劑。不能用1640稀釋么?另外質粒和轉染試劑為什么要先稀釋然后再混合?不能把轉染試劑直接加到質粒溶液中混合,然后再加培養基稀釋么?

A3:EZ Trans細胞轉染液屬于陽離子類型的轉染試劑,它與DNA形成復合物需要一定的條件,在合適的濃度下,有利于陽離子包裹DNA形成良好形態的復合物進入細胞。

  如果直接把兩者直接混合,兩者容易很快形成聚合物,聚集相態多樣,有可能使DNA暴露在表面,不容易進入細胞,進而降低轉染效率。所以EZ Trans和DNA的混合順序也很重要。

  培養細胞大多會用到胎牛血清,血清成分復雜,沒有人能說清成分及含量。細胞轉染液成分比較明確,但是不能確定是會不會與胎牛血清的不明成分結合,事實上這種現象在大多數轉染試劑中都會造成不良影響,所以在形成EZ Trans-DNA復合物過程中要避免血清的影響。

 

 

 

 

 

 

 


Q4:protocol提到,“24-48小時內檢測轉染效率"指的是去除含復合物的培養液換成含血清的培養基之后的24-48h,還是指加入復合物后轉染24-48h?

A4:所有時間都是從EZ Trans-DNA復合物與細胞接觸開始算。

 

 

 

 

 


 

Q5:我就是問的體內直接轉染小鼠。你們現有的protocol是體外實驗的方法?

A5:體內直接轉染目前最多的是腺病毒,慢病毒,腺相關病毒。轉染試劑直接在體內用的報道我們目前沒有聽過?,F有的做法是細胞在體外培養,轉染篩選后再打入體內。


文中涉及的生物試劑產品都為上海李記生物科技有限公司提供,還有WB技術服務等竭誠為您服務

 

 

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